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做轉染實驗,別忽視質粒中內毒素!
發布時間:2021-10-09 點擊次數:23次
什么是內毒素?
細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖(LipopolySaccharide,LPS)和蛋白的復合物,當細菌裂解時便會大量釋放出來。內毒素單位為EU。
內毒素對試驗的影響
內毒素存在極大程度地影響轉染效率。同時內毒素還可能激活免疫細胞的非特異反應,造成實驗中的假陽性。因此,為了保證高轉染率和轉染細胞高存活率,必須從質粒制備的過程中將內毒素去除。
內毒素和質粒的關系
由于內毒素兩親性和負電荷性,性質類似于DNA,因此在質粒純化中會伴隨質粒一同被純化出來。質粒中內毒素含量的高低常用EU/?g質粒表示。
按照EU/?g大小,質粒被分為三個級別:測序級別(>50EU/?g)、轉染級別(<50EU/?g)和無內毒素級別(<0.1EU/?g)。
再次強調
當你提取的質粒DNA是為了轉染原代細胞、懸浮細胞或者敏感細胞;進行基因沉默研究、細胞注射顯微操作;進行基因治療或者DNA疫苗等要求極為嚴格的實驗,就應該考慮Endotoxin-Free的質粒。
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