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做轉染實驗,別忽視質粒中內毒素!
發布時間:2021-10-09   點擊次數:23次

什么是內毒素?

細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁上的一種脂多糖(LipopolySaccharide,LPS)和蛋白的復合物,當細菌裂解時便會大量釋放出來。內毒素單位為EU。

內毒素對試驗的影響

內毒素存在極大程度地影響轉染效率。同時內毒素還可能激活免疫細胞的非特異反應,造成實驗中的假陽性。因此,為了保證高轉染率和轉染細胞高存活率,必須從質粒制備的過程中將內毒素去除。

內毒素和質粒的關系

由于內毒素兩親性和負電荷性,性質類似于DNA,因此在質粒純化中會伴隨質粒一同被純化出來。質粒中內毒素含量的高低常用EU/?g質粒表示。

按照EU/?g大小,質粒被分為三個級別:測序級別(>50EU/?g)、轉染級別(<50EU/?g)和無內毒素級別(<0.1EU/?g)。


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再次強調

當你提取的質粒DNA是為了轉染原代細胞、懸浮細胞或者敏感細胞;進行基因沉默研究、細胞注射顯微操作;進行基因治療或者DNA疫苗等要求極為嚴格的實驗,就應該考慮Endotoxin-Free的質粒。

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