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提取的核酸濃度太低,滿足不了下游實驗要求咋辦?
發布時間:2021-10-09   點擊次數:39次
  我們在進行分子生物學實驗的時候,通常會對生物大分子的濃度有一定的要求,比如您要進行轉染實驗,加入細胞的質粒濃度要求在1 µg/µl,這樣才能得到比較高的轉染效率??墒悄樘岬馁|粒濃度只有200 ng/µl,這時候該怎么辦呢?如何將質粒濃度濃縮到理想的濃度呢?
 
  常用的方法有兩種:乙醇沉淀法和離心濃縮法。
 
  乙醇沉淀法:
 
  操作步驟:
 
  1. 估算含有質粒溶液的體積V,加入V/9體積的3M NaAc ,使得NaAc終濃度為0.3M
 
  2. 加入2倍體積的冷無水乙醇,冰上或者-20℃孵育20min
 
  3. 最大離心速度(>13000rpm)離心10min,棄去上清
 
  4. 用75%乙醇洗滌2次
 
  5. 室溫晾干
 
  6. 加入適當體積的水或TE buffer 溶解即可
 
  (以上步驟來自分子克隆)
 
  經過一系列的復雜操作,再去做一下核酸定量檢測,你往往會發現,濃度比理想的要低很多!這是因為在整個過程中比較容易產生核酸的損失,比如乙醇沉淀步驟沒有將核酸完全析出、離心步驟沒有完全將核酸完全離心下來、去除上清時不小心將核酸吸出等。
 
  離心濃縮法:
 
  原理:借助于真空離心濃縮儀,將待濃縮的核酸樣品放入離心機中,用真空泵提高離心機中的真空度,在低壓下核酸溶液的沸點降低,在室溫下即可快速揮發以達到濃縮核酸溶液的目的。
 
  操作步驟:
 
  1. 將樣品管放入離心機中
 
  2. 設置離心機轉速、時間,點擊運行
 
  3. 打開真空泵
 
  4. 濃縮結束后取出樣品即可
 
  采用離心濃縮法具有更大的優勢:
 
  1. 操作簡單,避免復雜操作帶來樣品損失及污染
 
  2. 濃縮速度快,100µl的待濃縮樣品濃縮至20µl大約需要40min
 
  3. 成功率高,整個過程核酸分子均在EP管中,避免核酸損失
 
  4. 更好的保護核酸,常溫低壓下進行核酸濃縮,避免核酸降解
 
  因此,離心濃縮法越來越受到用戶的青睞!

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