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Western Blot為何標記二抗而不是一抗?
發布時間:2020-05-14   點擊次數:770次

    如果一抗上直接加標記,不但不能保證抗體抗原反映的特異性,也不能保證實驗的可重復性。

    首先,由于抗體都是人工去設計的,對于一個人工設計的蛋白質來說,你可以設計一個很好的抗體與他結合;然而對于天然蛋白質,你不能保證一個很高的識別率和準確度。所以,針對1抗,我們可以設計出完美的2抗,然而針對原蛋白質,你無法設計一個特別完美的1抗。所以,直接標記1抗的出來的結果是不準確的,而標記2抗是相對于1抗直接標記來說更準確的,所以經過大量的實驗之后人們拋棄了直接標1抗的方法。當然,標2抗也不是完全完美的,當然你也可以標3抗,4抗,不過那個成本就指數上升了,在保證一定的置信度的情況下,人們一般標到2抗就夠了。

    其次,對于同一個抗原,不同來源的1抗所識別的位置可能會有很大差異。這樣,你就無法保證試驗的可重復性。而1抗作為抗原來講,可以將它的抗原決定簇設計的一樣,這樣針對不同的1抗,2抗是可以保證差不多一個樣子的。而且這也給節約成本和方便標記帶來了方便。

    所以一般現在都是2步標記,第一個原因是主要的,第二個原因是次要的。

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