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古朵技術:抗體制備所需的基本要求
發布時間:2020-05-09   點擊次數:694次

啟動抗體制備前,我們需要搞清楚一下7個問題:
1.這個抗體用來做什么實驗(ELISA、IHC、Western Blot、IF或者IP等)?(功能性要求)
2.是否已有商品化的抗體可以滿足以上功能需求?(便利性要求)
3.抗體需要什么種屬來源(兔子、山羊、大鼠或小鼠等)?(抗體屬性要求)
4.需要多抗還是單抗?(品質性要求);
5.已具備的抗原信息或材料(抗原信息或材料:CDS序列,重組質粒,重組蛋白、多肽等)?(可能性要求);
6.是否可建立抗體質檢方法(標準的陽性標本及實施抗體實驗驗證的標準方法)?(可評價要求)
7.是否具備抗體生產平臺及經驗?(可行性要求)。

第一個要求——功能性要求:科研人員根據實驗需求提出對抗體的功能性要求;對一個抗體功能要求越多,其制備難度也就越大。

第二個要求——便利性要求:科研工作者對抗體提出需求,首先應考慮商品化抗體:優質商品化抗體一般都經過多層驗證和優化,可以直接購買使用,節約時間。一個抗體很難同時滿足幾項功能要求,這個時候可以考慮分別選購針對不同功能的抗體;除此之外,還需仔細查看抗體數據信息和實驗圖片,其實驗所采用的標本和方法與自己準備實驗的標本越相似越好。

第三個要求——抗體種屬要求:制備多抗選用多的是兔子,單抗選用多的是小鼠,對于抗體需求量較大,比如二抗,一般選擇山羊。對于其他種屬要求,除實驗設計需求,更多是因為抗原與免疫宿主親緣關系問題,一般來說親緣關系越遠,免疫原性越好。

第四個要求——品質性要求:大部人認為單抗比多抗好,其實也不盡然。單抗的特異性好,對于需要區分鑒定同源性較高的抗原或者對于特異性要求較高時,一般選擇單抗;另外,單抗性質比較穩定,理化性質均一(所有的抗體都是由相同細胞分泌出來)。多抗的優點是效價和靈敏度高,其針對一個抗原的多表位;與單抗相比,待檢標本中同樣的蛋白表達豐度,多抗會有更多抗體分子與抗原結合,信號更強,當然也可能引起非特異性問題。

第五個要求——可能性要求:大部人認為單抗比多抗好,其實也不盡然。單抗的特異性好,對于需要區分鑒定同源性較高的抗原或者對于特異性要求較高時,一般選擇單抗;另外,單抗性質比較穩定,理化性質均一(所有的抗體都是由相同細胞分泌出來)。多抗的優點是效價和靈敏度高,其針對一個抗原的多表位;與單抗相比,待檢標本中同樣的蛋白表達豐度,多抗會有更多抗體分子與抗原結合,信號更強,當然也可能引起非特異性問題。

第六個要求——可評價性要求:篩選方案和純化方法對抗體制備至關重要,質檢方法決定一個抗體的命運,你用什么篩選方法你就得到什么樣的抗體,所以在抗體制備之前必須要保證建立一個科學穩定符合質檢要求的抗體制備方法。

后一個要求——可行性要求:制備抗體前必須要擁有制備流程所必須的平臺設備以及專業人員,如果實驗室以前沒有涉及這塊并且以后也不打算建設此類平臺,本著“專業人做專業事zui節約成本”的原則,抗體制備的整個流程或者部分環節還是委托給專業公司。

Tips:專業抗體公司基本特點 1)有專業技術人員,可以回答您的實驗問題,所回答的問題實用,能解決問題。2)有專業平臺,制備抗體上下游有比較完善的平臺,這個可以咨詢他們的業務范圍。
3)商業口碑:身邊實驗室有沒有在此公司合作成功的案例。

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